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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產品型號：BC0240
更新時間：2025-08-29
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1545
010-50973130
產品分類
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土壤蔗糖酶( S-SC）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0240
規(guī)格：50T/24S 土壤蔗糖酶檢測試劑盒 可見分光光度法 土壤蔗糖酶檢測試劑盒 可見分光光度法
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體5 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：自備甲苯；
2、 試劑三：臨用前取1瓶加入15 mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存2周；
3、 標準品：臨用前加入1 mL蒸餾水溶解備用，2-8℃可保存2周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。
產品簡介：
S-SC能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收，其酶促作用產物與土壤中有機質、氮、磷含量，微生物數量及土壤呼吸強度密切關，是評價土壤肥力的重要指標。
S-SC催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內540nm光吸收增加速率與S-SC活性成正比。
Sucrose Reducing Sugare 3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid (540nm)
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目篩、冰、研缽、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，研磨，過30-50目篩。
二、測定步驟
1. 分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零。
2. 標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL，可參考下表。
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 250 | 250 | 0.5 |
3 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
4 | 1 | 150 | 350 | 0.3 |
5 | 1 | 100 | 400 | 0.2 |
6 | 1 | 50 | 450 | 0.1 |
備注：實驗中每個標準管需200µL標準溶液。
3. 加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
試劑一（μL） | 15 | 15 | - | - |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤，37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱放置15min - | ||||
試劑二（μL） | 250 | 250 | - | - |
試劑三（μL） | 750 | - | - | - |
蒸餾水（μL） | - | 750 | - | - |
混勻，放入37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時，10000g，4℃，離心5min，取上清液，將培養(yǎng)結束的上清液稀釋10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸餾水）若后續(xù)測定吸光值仍大于1.5繼續(xù)稀釋。
| ||||
上清液（μL） | 200 | 200 | - | - |
標準液（μL） | - | - | 200 | - |
蒸餾水（μL） | - | - | - | 200 |
試劑四（μL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻，放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，纏封口膜以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻。
540nm處蒸餾水調零，取全部反應液于1mL玻璃比色皿中，讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管（每個測定管需設一個對照管），ΔA標準=A標準管-A空白管。標準曲線和空白管只需測1-2次。
三、S-SC活性計算
1、標準曲線的建立：
根據標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
2、S-SC活性計算：
單位的定義：37℃，每天每g土樣中產生1mg還原糖定義為一個S-SC活力單位。
S-SC活力(U/g 土樣)= x ×10×V反總÷W÷T=101.5x
10：稀釋倍數；T：反應時間，1d；V反總：反應體系總體積，1.015mL；W：樣本質量，0.1g。
相關發(fā)表文獻：
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參考文獻：
[1] Gao M, Song W, Zhou Q, et al. Interactive effect of oxytetracycline and lead on soil enzymatic activity and microbial biomass[J]. Environmental toxicology and pharmacology, 2013, 36(2): 667-674.
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