細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC法)

產(chǎn)品說(shuō)明：
自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞噬物在溶酶體內(nèi)降解的過(guò)程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長(zhǎng)壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測(cè)自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑，其檢測(cè)激發(fā)濾光片波長(zhǎng) 355nm。阻斷濾光片波長(zhǎng) 512nm。細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒(MDC 法)，適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，又稱為 MDC 染色液，可與EB 合用雙染。

自備材料：
熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、EB 、載玻片、蓋玻片

操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨(dú)染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度106/ml。
4、 取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15～45min。
6、 800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞2次，棄上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)355nm，阻斷濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

注:貼壁細(xì)胞可以不消化，直接去除培養(yǎng)液，用1×Wash buffer清洗后進(jìn)行染色。MDC的量根據(jù)細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行調(diào)整。染色時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)根據(jù)染色結(jié)果進(jìn)行調(diào)整，染色結(jié)束后，用1×Wash buffer清洗觀察即可，不加Collection buffer。

(二)、與EB雙染色：
1、用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、800g離心5min，收集細(xì)胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細(xì)胞1次，棄上清。
3、加入適量的1×Wash buffer重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度106/ml。
4、取適量90μl的細(xì)胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
6、熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長(zhǎng)512nm)，計(jì)數(shù)并拍照。

相關(guān)文獻(xiàn)：

《Effect of Gpx3 gene silencing by siRNA on apoptosis and autophagy in chicken cardiomyocytes.》 作者:Yafan Gong  Jie Yang  Jingzeng Cai  Qi Liu  Jun min Zhang  Ziwei Zhang 期刊:J. Cell. Physiol. 影響因子:4.522 PMID:30515791
《Upregulation of DAPK2 ameliorates oxidative damage and apoptosis of placental cells in hypertensive disorder complicating pregnancy by suppressing human placental microvascular endothelial cell autophagy through the mTOR signaling pathway》 作者:Yan Wang,Lian-Lian Liu,Yuan Tian,Yang Chen,Wen-Hui Zha,Yang Li,Fu-Ju Wu 期刊:Int. J. Biol. Macromol. 影響因子:4.784 PMID:30243997
 

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