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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC4350-50T/48S
更新時(shí)間：2024-04-16
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1258
010-50973130
產(chǎn)品分類
組織鐵含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4350
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體55 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)液 | 液體3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前配制，取1瓶加入7.5 mL蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用，2-8℃保存一周；
2、 試劑二：臨用前配制，取1瓶加入375 μL冰 醋 酸，加入12 mL蒸餾水充分溶解；溶解后2-8℃保存一周；
3、 標(biāo)準(zhǔn)液：1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液。
4、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：臨用前取100μL 1 μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液，加入700μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要400μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）
產(chǎn)品說明：
鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸，促進(jìn)脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機(jī)體的免疫功能。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.00009449 μmol/mL
線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、氯仿、冰乙酸、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。4000g 4℃離心10分鐘，取上清。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長調(diào)至520nm。蒸餾水調(diào)零。
2. 加樣表：
空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
蒸餾水 | 400 | - | - |
0.125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | - | - | 400 |
樣本 | - | 400 | - |
試劑一 | 200 | 200 | 200 |
試劑二 | 400 | 400 | 400 |
混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻； | |||
氯仿（自備） | 200 | 200 | 200 |
充分震蕩混勻后室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層無機(jī)相800μL，加入1mL玻璃比色皿，于520nm立即測定吸光度，分別記為A空白管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管，計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，ΔA測定=A測定管-A空白管。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。 | |||
三、組織鐵含量計(jì)算
1．按組織質(zhì)量計(jì)算
組織鐵含量（μg/g 質(zhì)量）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷W=6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
2．按組織蛋白濃度計(jì)算
組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷（Cpr×V提?。?/span>
=6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.125μmol/mL Fe3+標(biāo)準(zhǔn)液；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提?。禾崛∫后w積，1mL；55.845：Fe的相對分子質(zhì)量，55.845μg/μmol。
注意事項(xiàng)：
1、 當(dāng)ΔA大于0.9 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定；ΔA過小時(shí)，可增加加入的樣本體積來測定。
2、 試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護(hù)措施。
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